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洗滌操作不規范：洗板不充分，使用手工洗板常出現。使用洗板機，或使用洗瓶洗滌。在兩次洗板之間加30秒的浸泡。 實驗中孵育溫度和時間不恰當：確定每一實驗步驟的孵育溫度和時間是否適當。酶加量過多：加酶前驗看移液器調節量是否準確。檢查稀釋度，若必要進行效價測定。 封閉不* 檢查封閉液的計算量，提高封閉時間。 標本或標準品的干擾物質：做適當的對照。 顯色劑受光照時間較長或污染：顯色劑A和B應于使用*分鐘從冰箱取出。 整批樣品放置時間過長樣品污染：樣品應保持新鮮，或低溫保存防止污染。 緩沖液污染：制備新鮮的緩沖液。 吸頭重復使用未洗凈或消毒不*而用于加酶或顯色劑：吸頭盡可能一次性使用。
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