一、移液操作要精準

?校準移液器?：定期用電子天平校準，確保加樣體積準確，減少人為誤差。

?預潤濕吸頭?：加樣前用洗滌液潤濕吸頭，避免氣泡干擾，提升重復性。

?練習加樣速度?：在空白板上練習快速加樣，縮短加樣時間差，減少孔間差異。

二、洗板步驟要規范

?使用洗板機?：自動洗板能保證每孔洗滌時間和力度一致，降低CV值。

?手工洗板注意?：若手動操作，確保每孔洗滌時間、力度相同，避免殘留不均。

三、ELISA試劑盒與樣本處理

?平衡至室溫?：所有試劑和樣本使用前室溫平衡30分鐘，減少溫度差異影響。

?樣本稀釋優化?：低濃度樣本適當稀釋，提高信噪比，減少背景干擾。

四、實驗設計優化

?設置復孔?：每個樣本做3-5個復孔，取平均值，降低單次測量誤差。

?預實驗驗證?：通過棋盤滴定法優化抗體濃度，選擇OD值接近1.2且背景的組合。

五、設備與質控

?校準酶標儀?：定期校準，確保讀數準確，避免設備誤差。

?設置質控孔?：每板加陰陽性對照，批內CV應<10%，批間CV<15%。

六、其他注意事項

?避免交叉污染?：使用一次性吸頭和封板膜，防止孔間污染。

?樣本處理?：凍融樣本充分混勻，渾濁樣本離心或過濾后檢測。